LC カラムの詰まり、汚れおよび/または高圧問題の一般的な原因は何ですか？ - WKB121927

環境

• カラムの詰まり
• 高い背圧
• トラブルシューティング

回答

早期の高圧問題を引き起こすカラムの詰まりの一般的な原因には、以下が含まれます：

1. 微生物の増殖/汚染（最も一般的な問題）

2. 移動相中の非生物学的粒子状物質

3. システムのウェアラブル部品から排出される非生物学的微粒子（ポンプシールなど）

4. カラムでのサンプルおよび/またはサンプルマトリックスの蓄積（カラムのクリーニングが必要）

5. 注入されるサンプル中の微粒子

6. 移動相に溶解しない場合の分析種の析出

7. 高有機溶媒に過度に速くさらされた場合のバッファー塩の析出

8. 流量が速すぎます（例えば、カラムの内径が 1.0 mm の場合、0.6 mL/分の流量により、カラムが圧力超過になってしまいます）。

9. 再使用可能なフィッティング（PEEK フェラルやワンピース手締めフィッティングなど）が折れ曲がったりつぶれたりします

追加情報

•  問題が微生物汚染の場合：
  • 微生物は充塡ベッドに埋め込まれているため、カラムを適切にクリーニングできません。
    • 微生物がカラムを汚染している場合は、逆向きのフラッシュ洗浄でもカラムはクリーニングされません。
      • この問題を解決するには、溶媒ボトルフィルター（シンカー）を廃棄し、（メーカーのガイドラインに従って）LC システムの汚染を除去し、新しいシンカーを取り付けます。
        • 以下を含む微生物汚染のリスクを低減するために、適切な移動相の取り扱いが必要です：
          • ボトル内に少なくとも 10% の有機溶媒がある場合を除き、塩のモル濃度が低い水系移動相（10 mM など）は、24 ～ 48 時間ごとに交換します。最低 10% の有機溶媒が含まれている場合、有機溶媒が十分に蒸発していない限り、毎週交換できます。
          • Waters BEH SEC カラムを用いたサイズ排除クロマトグラフィー（SEC メソッド）については、『サイズ排除クロマトグラフィー (SEC) 最適化ガイド』にある「移動相の取り扱い」セクションを参照してください
            • 関連するビデオを参照してください：水系移動相は毎日交換する必要がありますか？ | Trust your Science 7 - 微生物の増殖が 2 日以内にシステムを汚染し、クロマトグラフィーを混乱させる可能性があることを強調しています。
            • 関連するビデオを参照してください：水系移動相を殺菌するカラムの攻撃！ | Trust Your Science 18 - 緑色のレーザーは、移動相中の細菌の増殖を「目で見る」のに役立ちます。微生物汚染が SEC カラムに与える影響も示しています。
• 非生物学的微粒子（移動相、装置、サンプルなどから）により、カラムが詰まっている場合は：
  • 0.1 mL/分でカラムを（検出器ではなく）ビーカーに逆向きでフラッシュ洗浄することで、問題を解決できる場合があります。
    • 非生物学的サンプルによるカラムの詰まりを防ぐ方法：
      • 粒子径が 3.5 μm 以下のカラムの場合は、0.2 μm のフィルターで移動相をろ過します。
      • 粒子径が 3.5 μm 以上のカラムの場合は、0.45 μm のフィルターで移動相をろ過します。
      • プレカラムインラインフィルターまたはガードカートリッジの使用も、非生物学的微粒子によるカラムの詰まりを防ぐのに役立ちます。
      • 装置の予防メンテナンス (PM) が過去 12 ヶ月以内に実行されたかどうかを確認します。
        • ポンプシールは毎年交換する必要があります（より頻繁に交換する場合があります）。これらは時間が経つにつれて摩耗し、微粒子が移動相に流入し、そしてカラムのインレットフリットに流入する原因となることがあります。
• サンプルマトリックスがカラムで蓄積した場合は：
  • カラムは、カラムの維持管理マニュアルに従って、適切な溶媒でクリーニングすることができる場合があります。
• カラムで析出物がある場合は：
  • 非常に長くて浅いグラジエントを実行することで、析出物を再溶解できる場合があります。