LC カラム使用時のピーク割れの一般的な原因は何ですか？ - WKB194672

環境

• 超高速高分離液体クロマトグラフィー (UPLC)
• 超高速液体クロマトグラフィー (UHPLC)
• 高速液体クロマトグラフィー (HPLC)
• ピーク割れ
• トラブルシューティング

回答

すべてのピークが割れている場合は、以下の原因が考えられます。

1. インジェクターと検出器の間の流路のどこかに不適切な接続があります。例えば：

• PEEK 手締めフィッティング使用時のチューブのずれ
• ステンレススチール製フィッティングまたは他のフィッティングのフェラルの深さが不適切
• 接続部内の小さな空隙
• すべてのピークに影響がある場合、デッドボリュームは多くの場合、カラムの後にある

2. カラムのインレットに詰まった微粒子は、以下のようなものが生じる可能性があります：

• サンプル中の微粒子
• 移動相中の微粒子
• 微生物の汚染

3. サンプル溶媒の影響が強いです（すべてのピークに影響することがあります）。例えば：

• 開始移動相と比較して、サンプル希釈液に非極性溶媒（逆相）の割合が高い場合
• 開始移動相と比較して、サンプル希釈液に含まれる極性溶媒（順相、HILIC）の割合が高い場合

4. 質量分析計を使用している場合、エミッターが汚れており、ピーク形状に問題が発生することがあります。プローブ（工具不要のバージョンのプローブではない）にデッドボリュームがある場合もあります。

5. 糖を HILIC クロマトグラフィーで分析すると、糖がアノマーを形成することがあります（開鎖と閉鎖）。

6. カラムが汚れている可能性があります（サンプルマトリックスの蓄積）。

 

一部のピークのみが他のいくつかのピークとの混合内で割れている場合：

1. サンプル溶媒の影響が強いです（早く溶出するピークに影響することがあります）。例えば：

• 開始移動相と比較して、サンプル希釈液に非極性溶媒（逆相）の割合が高い場合
• 開始移動相と比較して、サンプル希釈液に含まれる極性溶媒（順相、HILIC）の割合が高い場合

2. 糖を HILIC クロマトグラフィーで分析すると、糖がアノマーを形成することがあります（開鎖と閉鎖。必ずしもすべてのピークとは限りません）。

3. インジェクターとカラムの間の流路のどこかに不適切な接続があります。例えば：

• PEEK 手締めフィッティング使用時のチューブのずれ
• ステンレススチール製フィッティングまたは他のフィッティングのフェラルの深さが不適切
• 接続部内の小さな空隙
• ピーク形状が保持時間の変化につれて改善する場合、デッドボリュームは多くの場合カラムの前にあり、カラムに焦点を再度合わせた結果、ピーク形状は復元されます

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