逆相 LC カラム使用時のピークテーリングの一般的な原因は何ですか？ - WKB237593

環境

• 超高速高分離液体クロマトグラフィー (UPLC)
• 超高速液体クロマトグラフィー (UHPLC)
• 高速液体クロマトグラフィー (HPLC)
• ピークテーリング
• トラブルシューティング

回答

すべてのピークでテーリングが発生する場合は、以下の原因が考えられます。

1. すべての分析種が塩基性の場合、すべてのピークで「塩基性テーリング」が発生することがあります。

• 塩基性分析種は、以下の場合に、逆相カラムで弱陽イオン交換によりテーリングが発生します。
  1. 移動相の pH により、塩基性分析種が正電荷を帯びます
  2. 移動相の pH により、粒子表面のシラノール残基が負に帯電します（通常は pH 約 2.5 以上）
  3. 上記の条件が満たされ、イオン対試薬を使用していない場合

2. インジェクターと検出器の間の流路のどこかに不適切な接続があります。例えば：

• PEEK 手締めフィッティング使用時のチューブのずれ
• ステンレススチール製または他のフィッティングのフェラルの深さが不適切
• 接続部内の小さな空隙

3. サンプル溶媒の影響が強いです（すべてのピークに影響し、テーリングを示す可能性がありますが、通常は非対称のピーク形状やピーク割れと見なされます）。例：

• 開始移動相と比較して、サンプル希釈液に非極性溶媒（逆相）の割合が高い場合
• 開始移動相と比較して、サンプル希釈液に含まれる極性溶媒（順相、HILIC）の割合が高い場合

4. 質量分析計を使用している場合、エミッターが汚れており、ピーク形状に問題が発生することがあります。プローブ（工具不要のバージョンのプローブではない）にデッドボリュームがある場合もあります。

 

いくつかの他のピークの組み合わせ内で、一部のピークでしかテーリングが発生していない場合、以下の原因が考えられます。

1. これらの特定の分析種が塩基性であり、他の分析種がそうではない場合、「塩基性テーリング」は一部のピークでしか発生しないことがあります。

• 塩基性分析種は、以下の場合に、逆相カラムで弱陽イオン交換によりテーリングが発生します。
  1. 移動相の pH により、塩基性分析種が正電荷を帯びます
  2. 移動相の pH により、粒子表面のシラノール残基が負に帯電します（通常は pH 約 2.5 以上）
  3. 上記の条件が満たされ、イオン対試薬を使用していない場合

2. サンプル溶媒の影響が強いです（より早く溶出するピークにのみ影響し、テーリングを示す可能性がありますが、通常は非対称のピーク形状やピーク割れと見なされます）。例：

• 開始移動相と比較して、サンプル希釈液に非極性溶媒（逆相）の割合が高い場合
• 開始移動相と比較して、サンプル希釈液に含まれる極性溶媒（順相、HILIC）の割合が高い場合

 

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