AccQ•Fluor および AccQ•Tag Ultra 試薬はアミノ酸をどのように誘導体化しますか？ - WKB238328

環境

• AccQ•Fluor
• AccQ•Tag
• アミノ酸分析 (AAA)
• 誘導体化

回答

AccQ•Fluor および AccQ.Tag Ultra 試薬は、両方の試薬キットに同じコンポーネントが含まれているため、同じ方法でアミノ酸を誘導体化します。

AccQ•Tag Ultra メソッドは、アミノ酸分析用に特別に開発された誘導体化試薬に基づいています。Waters AccQ•Tag Ultra 試薬（6-アミノキノリル-N-ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート、または AQC）は、N-ヒドロキシスクシンイミド活性化複素環状カルバメート（アミン誘導体化化合物のクラス）です。

図 1-1：Waters AccQ•Tag Ultra 試薬

試薬ケミストリー：

AccQ•Tag Ultra 試薬は、下図に示されているように、一級および二級アミノ酸の両方を安定した誘導体に変換します。誘導体化基の構造はすべてのアミノ酸で同じで、UV 吸光度と蛍光特性の両方が追加されます。過剰な試薬は加水分解して、干渉のない副生成物である 6-アミノキノリン (AMQ) を生成します。注：誘導体化ピークはクロマトグラムでラベル付けられ、常に現れます。そのサイズと量はバッチによって異なり、時間とともに変化します。そのばらつきのため、ピークのサイズは定量または診断で重要ではありません。

図 1-2：AccQ•Tag Ultra 反応：

アミノ酸との反応：

AccQ•Tag Ultra 試薬は、一級および二級のアミノ酸と迅速に反応し、非常に安定した尿素を生成します。サンプル溶媒の蒸発を防ぐ場合、得られた誘導体は室温で 1 週間安定します。

試薬の加水分解：

より遅い反応では、過剰な試薬が加水分解して、6-アミノキノリン (AMQ)、N-ヒドロキシスクシンアミド (NHS)、および二酸化炭素を生成します（下図を参照）。過剰な試薬の分解が 1 分以内に発生します。主要な加水分解生成物である AMQ は、クロマトグラフィーで簡単に分離される重要なピークを生成します。NHS および二酸化炭素は分析に干渉しません。

図 1-3：水の存在下での AccQ•Tag Ultra の反応

 

追加情報

誘導体化ピーク (AMQ) は、すべての AccQ•Tag クロマトグラフィーに常に存在し、標識アミノ酸から分離する必要があります。

HPLC 用の従来の AccQ-Tag メソッドでは、関連する HPLC AccQ-Tag 溶離液で蛍光検出器を使用するため、蛍光条件下では、レスポンスにより AMQ のピーク高さが低くなります。

AccQ-Tag 誘導体化ピーク (AMQ) は UV で強いレスポンスを生成し、ACQUITY UPLC システムの HPLC メソッドおよび AccQ•Tag Ultra メソッドの両方で見られます。

関連情報：

AccQ•Fluor Reagent Kit Care & Use Manual（『AccQ•Fluor 試薬キット維持管理マニュアル』）（リットコード wat0052881）

AccQ•Tag Ultra Derivatization Kit Care & Use Manual（AccQ•Tag Ultra 誘導体化キット維持管理マニュアル）（リットコード 715001331）