アプリケーションノート 720007853JA（『mRNA のポリ(A) テール分析向けのサイズ排除クロマトグラフィー分析法』）でオリゴから3' リン酸基を除き、pH 8.0 のバッファーを使用するのはなぜですか？ - WKB260248

環境

• オリゴヌクレオチド
• mRNA
• ポリ(A) テール

回答

3' リン酸基の除去はオプションのステップです。

ただし、

Waters は、ポリ(A) 分子種の自然発生的なリン酸化が溶液中で発生することがあるのを発見しました。Quick CIP (QCIP) 酵素の添加により、溶液中のサンプルが数日間安定します。QCIP 酵素は、消化物中に存在する短いオリゴからリン酸も除去します。その結果、QCIP を添加した場合と添加しない場合の SEC クロマトグラムは、少し異なって見えます。

LC システムの流路内のステンレススチール製表面およびステンレススチール製カラムハードウェアへのオリゴの非特異的吸着を低減するために、pH 8.0 を使用します。pH 7.5 もこの分析法で良好に機能します。

ACQUITY Premier Protein SEC 250A カラムの使用により、これらのカラム（フリットおよびカラム本体）のステンレススチール製表面へのオリゴの非特異的吸着が大幅に低減または除去されます。

追加情報

Quick CIP 酵素は、オリゴヌクレオチドの末端からリン酸を除去します。

ACQUITY Premier システムの Web ページ

Low Adsorption UPLC Systems and Columns Based on MaxPeak High Performance Surfaces: The ACQUITY PREMIER Solution（MaxPeak High Performance Surface に基づいた低吸着 UPLC システムおよびカラム：ACQUITY Premier ソリューション）

MaxPeak Premier Protein SEC カラムのインフォグラフィック

ACQUITY Premier カラムによるオリゴヌクレオチド分析 - インフォグラフィック

アプリケーションノート：mRNA のポリ(A) テール分析向けのサイズ排除クロマトグラフィー分析法