ACQUITY Premier Glycan BEH C18 AX カラムを使用するとき、RapiFluor-MS ブランク試料の干渉ピークを低減する方法 - WKB231393

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環境

ミックスモードクロマトグラフィー
架橋エチレンハイブリッド (BEH)
陰イオン交換 (AX)
GlycoWorks
RapiFluor-MS
ACQUITY Premier Glycan BEH C18 AX

回答

High sensitivity acidic N-glycan profiling with MS-enhancing derivatization and mixed-mode chromatography（MS 検出を向上させる誘導体化およびミックスモードクロマトグラフィーを用いた、N 型糖鎖の高感度プロファイリング）を参照してください

追加情報

上記のリンクされている記事からの抜粋：

「その選択性を考慮すると、ミックスモードクロマトグラフィーは HILIC よりもサンプル前処理からの干渉を受けやすいように見られます。RFMS による誘導体化からのいくつかの蛍光活性試薬ピークは、糖鎖溶出ウィンドウ内で同定されました。これらのピークのほとんどは、糖鎖誘導体化反応の副生成物および固相抽出 (SPE) クリーンアップステップから混入された不純物に由来することがわかりました。これらの干渉はそれぞれ、元の RFMS サンプル前処理プロトコルを調整することで大幅に低減できます[18]。m/z 450.2 Da の RFMS 副生成物ピークは、固相抽出 (SPE) クリーンアップステップを繰り返し実行することで正常に除去できました（補足の図 S5 を参照）。また、リン酸イオンのピークは、酵素的脱グリコシル化の前にサンプルを脱塩することで除去できました（補足の図 S6 を参照）。RFMS 標識糖鎖が m/z 700 ～ 2000 の取り込みウィンドウで選択的に検出できるため、これらの干渉は MS 検出に干渉しません。追加の固相抽出 (SPE) クリーンアップステップによるサンプルの損失がわずかである点も重要です。この研究で試験したサンプルでは、1 パスの固相抽出 (SPE) と比較して、2 パスからは 90% 以上の糖鎖回収率が得られています。固相抽出 (SPE) 手順の最適化の情報については、補足資料を参照してください。」