SEC 分析の LC バンドの広がりを測定する方法 - WKB83286

目的または目標

サイズ排除クロマトグラフィーの分析法移管のための LC バンドの広がりの決定、および/またはカフェインサンプルを使用したトラブルシューティング

環境

• ACQUITY H-Class Bio
• ACQUITY Arc Bio
• Alliance HPLC
• SEC カラム

手順

1. カラムをゼロボリュームユニオン (700002636) に交換します。

2. 全ての溶媒ライン、洗浄ラインおよびパージラインを 50:50 水/アセトニトリルでパージします。

3. 装置メソッドを次のパラメーターで作成します：

• 分析時間が 1 分
• 100% 溶媒 A での流量が 0.5 mL/分（アイソクラティック）
• カラムヒーターがオフ
• 40 ポイント/秒以上のサンプリングレートで、波長を 273 nm に設定します

4. 0.5 µL の移動相ブランク（50:50 水/アセトニトリル）を 3 回注入します。
5. 濃度 0.160 mg/mL のカフェイン 0.5 µL を含む 50:50 水/アセトニトリル（例：ACQUITY UPLC/UV 適格性評価標準試料キット（700002642、溶液 7）からのカフェイン）を 5 回注入します。
6. 拡散を計算するには：

• カフェインサンプルのピーク高さ 4.4% でのピーク幅を分単位で測定します。
• ピーク幅に流量を掛けて、ピーク容量 (ｍL) を決定し、次に 1000 を掛けてピーク容量 (μL) を決定します。

追加情報

タンパク質の SEC に対する LC バンドの広がりの影響については、https://www.waters.com/waters/library.htm?cid=511436&lid=134996381&locale=en_BE を参照してください