BioAccord 細胞培養培地システムの適合性試験の実行方法 - WKB231508

1) はじめに

SST は、ルーチン使用前に LC-MS システム全体が完全に動作することを確認するように設計されています。この試験は、Waters 認定の標準試料溶液（Vion 試験混合液）を使用して、厳密な品質基準（質量精度、RT 安定性、ピーク分離、ピークレスポンスの再現性、溶媒バックグラウンド）が 10 分間の分析で評価されるように設計されています。これは、データ取り込みを実行する前に LC-MS 装置のステータスを評価するのに役立ちます。このメソッドにより、品質基準として質量と保持時間を使用して、9 つの物質のスクリーニングが可能になります。このメソッドは、システムのスクリーニング機能をさらに実証するために、マッチしたフラグメントを表示および同定することもできます。

お客様のデータで最高レベルの信頼性を保つするために、この試験または同様の試験を定期的に実行することを、Waters は推奨します。

ポジティブイオンモードで注入された 9 つの化合物の抽出イオンクロマトグラムの例。

2) チェックリスト

• 溶媒を確認し、ACQUITY Premier LC システムと洗浄シリンジをプライムします。
• 新しい分析を作成します。
• 初期条件に移動します。
• ブランク試料を 2 回注入し、Vion 試験混合液を 5 回注入します。
• レポートをレビューして、システムがパフォーマンス基準を満たしていることを確認します。

3) サンプルの前処理

• 1 mL の H₂O および 0.1% FA（移動相 A）を Waters バイアルに移してブランクサンプルを調製し、サンプルマネーきゃの位置 1:A,1 に配置します。
• Waters 部品 186008462 Vion 試験混合液の内容物を Waters バイアルに移し、サンプルマネーきゃの位置 1:A,2 に配置します。

4) 詳細手順

1. ACQUITY Premier UPLC 溶媒ボトルを確認し、移動相が十分にあることを確認します。
2. 位置 1:A,1 にブランク試料があること、および位置 1:A,2 に Vion 試験混合液があることを確認します。
3. 十分なロックマス溶液があることを確認します（RDa 流路系の左ボトル）。
4. UNIFI ソフトウェアを開きます。
5. SST を初めて実行するとき、UNIFI UEP ファイルをインポートします。
   • UNIFI に「SST CCM.uep」ファイルをインポートします（これにはサンプルリスト、分析メソッド、データ例およびレポートテンプレートが含まれている）。
6. ［Create analysis by acquiring new data］（新しいデータを取り込んで分析を作成）を選択して、分析を新規作成します。
7. 「CCM SST sample list」（CCM SST サンプルリスト）を選択します。
8. 「CCM SST Analysis Method」（CCM SST 分析メソッド）を選択し、［Next］（次へ）をクリックします。
9. 必要に応じて分析名とフォルダーを調整し、［Next］（次へ）をクリックします。
10. システムを選択し、［Next］（次へ）をクリックしてから、［Finish］（完了）をクリックします。
11. 右下の緑色のチェックマークアイコンをクリックして、［Instrument System］（装置システム）サイドパネルを開きます。
12. バイナリーソルベントマネージャで、［Prime A/B solvents］（A/B 溶媒のプライム）を選択し、［start priming］（プライムを開始）を選択し、画面を閉じます。
13. サンプルマネージャ FTN で、［Prime Syringe］（シリンジのプライム）を選択し、プライムを実行し、完了したら画面を閉じます。
14. ［Summary］（サマリー）で、［Go to initial conditions］（初期条件へ移行）を選択します。
15. バイナリーソルベントマネージャの圧力差が 30 psi 未満になるまで待ちます。
16. 注入するサンプルリストの行を選択します。
17. ［Start］（開始）ボタンをクリックします（必ず、［Process samples］（サンプルの解析）、［Save results］（結果の保存）、［Generate a report］（レポートの生成）、［Save report and do not print］（レポートを保存して印刷しない）を選択してください）。
18. 取り込みが完了したら、合格または不合格についてレポートをレビューします。（レポート例を参照：「CCM SST Report.pdf」）

SST 合格：完了

BioAccord LC-MS システムは完全に動作可能です。質量精度、RT 安定性、MS レスポンス、および再現性の品質基準は、ポジティブおよびネガティブの極性ごとに 5 回の注入を繰り返して、予想内にあります。この分析結果は次の基準を満たしています：1). 同定成分の質量精度が +/- 5 mDa 以内である 2). 実測 RT の %RSD が 1.00% を超えている 3). MS レスポンスの %RSD が 10.0% を超えている 4). スルファジメトキシンの平均レスポンスが、ポジティブ極性で 5,000 カウントを超えている 5). スルファジメトキシンの平均レスポンスが、ネガティブ極性で 1,000 カウントを超えている

SST 不合格：エラー付きで完了

BioAccord LC-MS システムでは、新しいデータを取り込む前にユーザーの注意が必要です。ポジティブおよびネガティブの極性それぞれでの 5 回の繰り返し注入で、1 つ以上の品質基準が予期した結果を満たしていません。レポートの次のページでは、合格基準が達成されていない場合は、赤色のフラグが示されます。

以下に、システムのトラブルシューティングのヒントをいくつか示します。

1). 質量誤差フラグを使用するには、新しい RDa 検出器をセットアップする必要があります。
2). 実測 RT %RSD および MS レスポンス %RSD のフラグは、クロマトグラフィーシステムの問題を示しています。そのためには、流路にリークがないか確認し、新しい溶媒を調製し、システムをプライムする必要があります。
3). スルファジメトキシンのレスポンスに関するフラグは、RDa 検出器の感度に問題があることを示します。このためには、新しいサンプルを作成するか、アパーチャーディスクを交換する必要があることがあります。
4). 分析注入リストの範囲ステータス列では、問題の原因となっている特定の注入をレビューできます

5) 分析メソッド

 

目的 成分の管理
成分名	予想 RT（分）	予想ニュートラル質量 (Da)	付加イオン	組成式	濃度 (µg/mL)
スルファグアニジン	2.40	214.0524	+H、-H	C7H10N4O2S	5.0
アセトアミノフェン	3.60	151.0633	+H、-H	C8H9NO2	10.0
Val-tyr-val	3.80	379.2107	+H、-H	C19H29N3O5	2.5
カフェイン*	4.00	194.0804	+H	C8H10N4O2	1.5
ロイシンエンケファリン	4.60	555.2693	+H、-H	C28H37N5O7	2.5
ベラパミル*	5.70	454.2832	+H	C27H38N2O4	0.2
スルファジメトキシン	5.80	310.0736	+H、-H	C12H14N4O4S	1.0
レセルピン*	5.90	608.2734	+H	C33H40N2O9	0.6
テルフェナジン*	6.50	471.3137	+H	C32H41NO2	0.2
*化合物はネガティブイオンモードでイオン化しません。
目的 既定量
カスタムレベルの追加	ポジティブ	ネガティブ

 

 

装置 カラムのケミストリー	ACQUITY Premier HSS T3 2.1 × 150 mm (186009469)
カラム温度	40 ℃
流量	250 μL/分
移動相 A	H2O / 0.1% FA
移動相 B	90% ACN/10% IPA/0.1% FA
洗浄	40% ACN/40% H2O/20% IPA
パージ	90% H2O/10% ACN
シール洗浄	90:10 水/メタノール

 

 

時間（分）	流量（mL/分）	組成 A (%)	組成 B (%)	曲線
0.00	0.250	95.0	5.0	初期
0.50	0.250	95.0	5.0	6
7.00	0.250	15.0	85.0	6
7.80	0.250	15.0	85.0	6
8.00	0.250	95.0	5.0	6
10.00	0.250	95.0	5.0	6

 

 

ACQUITY RDa 検出器
モード	「フルスキャン」または「フラグメンテーションによるフルスキャン」
質量範囲	低分子（50 ～ 800 m/z）
極性	ポジティブまたはネガティブ
スキャンレート	5 Hz
コーン電圧	ポジティブ極性の既定電圧 (30 V) およびネガティブ極性の既定電圧 (40 V)
フラグメンテーションコーン電圧	カスタム（60 V ～ 140 V）
イベントテーブル	0.00、廃液へ転流 1.00、MS へ転流 8.00、廃液へ転流
キャピラリー電圧	ポジティブ極性の既定電圧 (1.50 kV) およびネガティブ極性の既定電圧 (0.80 kV)
脱溶媒温度	デフォルト (550 ℃)
インテリジェントデータキャプチャー	オン
ロックマス補正モード	標準試料

 

 

サンプルリストの設定
サンプルの種類	ブランクまたは QC
分析時間（分）	10
注入量 (µL)	0.5
繰り返し回数	1
極性（装置）	ポジティブ/ネガティブ

 

 

Peak Processing Settings（ピーク解析設定） 3D Peak Detection（3D ピーク検出）
Low energy intensity threshold（低エネルギーの強度スレッシュホールド）	1000 カウント
Targeted Screen Settings（ターゲットのスクリーニング設定） Target by Retention Time（保持時間によるターゲット）
Enable screen by retention time（保持時間によるスクリーニングの有効化）	Enabled（有効）
Identify target peak using rule（ルールを使用してターゲットピークを同定する）	Largest in the RT window（RT ウィンドウで最大）
Use absolute retention time identification tolerance（絶対保持時間同定許容値を使用）	0.5 分
Targeted Screen Settings（ターゲットのスクリーニング設定） Target by Mass（質量によるターゲット）
Target mass tolerance（ターゲット質量許容値）	20 ppm
Generate predicted fragments from structure（構造式からペプチドフラグメントを生成する）	Enabled（有効）
Fragment match tolerance（フラグメントマッチ許容値）	10.0 mDa
Extract mass chromatogram（質量クロマトグラムの抽出）	Enabled（有効）
Tolerance（許容値）	Manual（手動）、30 mDa
Extract mass chromatogram containing all identified ions（同定済みのすべてのイオンを含む質量クロマトグラムを抽出）	Enabled（有効）
サマリー計算
フィールド	サンプルの種類	グループの順序
実測 RT（分）	QC	サンプル位置
MS レスポンス	QC	サンプル位置
範囲チェック
ノード	フィールド名	成分	レベル	誤差最小値	誤差最大値
成分	質量誤差 (mDa)	すべて	すべて	-5	5
サマリーフィールド	実測 RT（分）：% RSD (%)	すべて	すべて		1
サマリーフィールド	MS レスポンス：% RSD (%)	すべて	ポジティブ		10
サマリーフィールド	MS レスポンス：% RSD (%)	すべて	ネガティブ		10
サマリーフィールド	MS レスポンス：平均	スルファジメトキシン	ポジティブ	5000
サマリーフィールド	MS レスポンス：平均	スルファジメトキシン	ネガティブ	1000

すべての範囲チェックフィールドのサンプルの種類は［QC］です